ዜና - ኑክሊክ አሲድ የማውጣት ቴክኖሎጂ መግቢያ

ⅠNዩክሊክ አሲድiመግቢያ

ኑክሊክ አሲድ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ (ዲ ኤን ኤ) እና ራይቦኑክሊክ አሲድ (አር ኤን ኤ) የተከፋፈለ ሲሆን ከእነዚህም መካከል አር ኤን ኤ ራይቦሶማል አር ኤን ኤ (አር ኤን ኤ)፣ መልእክተኛ አር ኤን ኤ (ኤምአርኤን) እና አር ኤን ኤ (tRNA) እንደ ተለያዩ ተግባራቶቹ ይከፋፈላል።ዲ ኤን ኤ በዋናነት በኒውክሊየስ፣ ሚቶኮንድሪያ እና ክሎሮፎርም ውስጥ የተከማቸ ሲሆን አር ኤን ኤ በዋናነት በሳይቶፕላዝም ውስጥ ይሰራጫል።የጂን አገላለጽ ቁሳዊ መሰረት እንደመሆኑ መጠን ኑክሊክ አሲድ ማውጣት በሞለኪውላር ባዮሎጂ ምርምር እና ክሊኒካዊ ሞለኪውላዊ ምርመራ ውስጥ እጅግ በጣም ጠቃሚ ሚና ይጫወታል።የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት ትኩረት እና ንፅህና በቀጣይ PCR, ቅደም ተከተል, የቬክተር ግንባታ, የኢንዛይም መፈጨት እና ሌሎች ሙከራዎች ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል.

Ⅱ ኑክሊክ አሲድ የማውጣት እና የማጥራት ዘዴ

① የፔኖል/ክሎሮፎርም የማውጣት ዘዴ

ፌኖል/ክሎሮፎርም ማውጣት ለዲኤንኤ ማውጣት ክላሲካል ዘዴ ነው፣ ይህም ናሙናዎችን ለማከም በዋናነት ሁለት የተለያዩ ኦርጋኒክ መሟሟቶችን ይጠቀማል፣ ዲ ኤን ኤ ላይ የተመሰረተ ኑክሊክ አሲድ በውሃው ክፍል ውስጥ ይሟሟል፣ በኦርጋኒክ ምዕራፍ ውስጥ ያሉ ቅባቶች እና ፕሮቲኖች በሁለቱ ደረጃዎች መካከል።ይህ ዘዴ ዝቅተኛ ዋጋ, ከፍተኛ ንፅህና እና ጥሩ ውጤት ያለው ጥቅሞች አሉት.ጉዳቶቹ ውስብስብ ቀዶ ጥገና እና ረጅም ጊዜ ናቸው.

② Trizol ዘዴ

ትራይዞል ዘዴ ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ክላሲካል ዘዴ ነው።የ Trizol ዘዴ ክሎሮፎርም ጋር centrifugation በኋላ aqueous ዙር እና ኦርጋኒክ ዙር የተከፋፈለ ነው, ይህም ውስጥ አር ኤን ኤ ወደ aqueous ዙር ውስጥ የሚቀልጥ ነው, aqueous ዙር ወደ አዲስ EP ቱቦ ይተላለፋል, isopropanol በማከል በኋላ ዝናብ, ከዚያም ኤታኖል የመንጻት.ይህ ዘዴ ከእንስሳት ቲሹዎች, ሴሎች እና ባክቴሪያዎች ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ተስማሚ ነው.

③ ሴንትሪፉጋል አምድ የማጥራት ዘዴ

ሴንትሪፉጅ አምድ የማጥራት ዘዴ ዲኤንኤ በልዩ የሲሊኮን ማትሪክስ ማስታዎቂያ ማቴሪያሎች ማስተዋወቅ የሚችል ሲሆን አር ኤን ኤ እና ፕሮቲን ያለችግር ሊያልፉ ይችላሉ እና ከዚያም ከፍተኛ የጨው ዝቅተኛ ፒኤች በመጠቀም ኑክሊክ አሲድን በማጣመር ኑክሊክ አሲድን ለመለየት እና ለማጣራት አነስተኛ ጨው ከፍተኛ የPH እሴት።ጥቅሞቹ ከፍተኛ የመንጻት ትኩረት, ከፍተኛ መረጋጋት, የኦርጋኒክ መሟሟት አያስፈልግም እና ዝቅተኛ ዋጋ ናቸው.ጉዳቱ በሴንትሪፉፍ ደረጃ በደረጃ፣ ተጨማሪ የክዋኔ እርምጃዎች ያስፈልገዋል።

④ መግነጢሳዊ ዶቃዎች ዘዴ

የመግነጢሳዊ ዶቃዎች ዘዴ የሕዋስ ቲሹን ናሙና በሊዛት በኩል በመከፋፈል በናሙናው ውስጥ የሚገኘውን ኑክሊክ አሲድ መልቀቅ እና ከዚያም የኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች በማግኔት ዶቃው ላይ በተለይ ተለጥፈው ሲገኙ እንደ ፕሮቲኖች እና ስኳሮች ያሉ ቆሻሻዎች ይቀራሉ። ፈሳሹን.በሴል ቲሹ ክፍፍል ደረጃዎች ፣ ማግኔቲክ ዶቃ ከኒውክሊክ አሲድ ፣ ኑክሊክ አሲድ እጥበት ፣ ኑክሊክ አሲድ ኢሌሽን ፣ ወዘተ ጋር ፣ ንፁህ ኑክሊክ አሲድ በመጨረሻ ተገኝቷል።ጥቅሞቹ ቀላል ቀዶ ጥገና እና የአጭር ጊዜ አጠቃቀም ናቸው, የእርምጃ ማእከላዊ ሳያስፈልግ.ዝቅተኛ ቴክኒካዊ መስፈርቶች አሉት እና አውቶማቲክ እና የጅምላ አሠራር መገንዘብ ይችላል.ልዩ የመግነጢሳዊ ዶቃ እና ኑክሊክ አሲድ ጥምረት የተወጣውን ኑክሊክ አሲድ ከፍተኛ ትኩረት እና ንጽህና ያለው ያደርገዋል።ጉዳቱ አሁን ያለው የገበያ ዋጋ በአንጻራዊነት ውድ ነው።

⑤ ሌሎች ዘዴዎች

ከላይ ከተጠቀሱት አራት ዘዴዎች በተጨማሪ መፍላት, የተከማቸ የጨው ዘዴ, አኒዮኒክ ዲተርጀንት ዘዴ, የአልትራሳውንድ ዘዴ እና የኢንዛይም ዘዴ, ወዘተ.

Ⅲ የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት አይነት

Foregene በዓለም መሪ ቀጥተኛ PCR መድረክ አለው፣ ባለ ሁለት አምድ አር ኤን ኤ ማግለል መድረክ (ዲ ኤን ኤ ብቻ + አር ኤን ኤ ብቻ)።ዋናዎቹ ምርቶች የዲ ኤን ኤ/አር ኤን ኤ ማግለል ኪቶች፣ PCR እና Direct PCR reagents የሞለኪውላር ቤተ ሙከራ ሪጀንቶች ተከታታይ ያካትታሉ።

① አጠቃላይ አር ኤን ኤ ማውጣት

አጠቃላይ የአር ኤን ኤ ማውጣት ናሙናዎች ደም፣ ህዋሶች፣ የእንስሳት ቲሹዎች፣ እፅዋት፣ ቫይረሶች፣ ወዘተ... ከፍተኛ ንፅህና እና ከፍተኛ መጠን ያለው የአጠቃላይ አር ኤን ኤ በጠቅላላ በአር ኤን ኤ ማውጣት ሊገኝ ይችላል ይህም በ RT-PCR፣ ቺፕ ትንተና፣ በብልቃጥ ትርጉም፣ ሞለኪውላር ክሎኒንግ፣ ዶት ብሎት እና ሌሎች ሙከራዎች።

ከቀድሞው ጋር የተያያዘአር ኤን ኤ ማግለል ኪትስ

የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ--በፍጥነት እና በብቃት ከፍተኛ-ንፅህናን እና ከፍተኛ ጥራት ያላቸውን አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከተለያዩ የእንስሳት ህዋሶች ማውጣት።

የሕዋስ ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ--በጣም የተጣራ እና ከፍተኛ ጥራት ያለው አጠቃላይ አር ኤን ኤ በ11 ደቂቃ ውስጥ ከተለያዩ የሰለጠኑ ሴሎች ማግኘት ይቻላል።

የእፅዋት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ--ከፍተኛ ጥራት ያለው አጠቃላይ አር ኤን ኤ ዝቅተኛ የፖሊስካርዴድ እና የፖሊፊኖል ይዘት ካለው የእፅዋት ናሙናዎች በፍጥነት ያውጡ።

የቫይረስ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት--የቫይራል አር ኤን ኤን በፍጥነት ከፕላዝማ፣ ከሴረም፣ ከሴል-ነጻ የሰውነት ፈሳሾች እና ከህዋስ ባህል ሱፐርናታንትስ ለይተው ያፅዱ።

② የጂኖሚክ ዲኤንኤ ማውጣት

የጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ማውጣት ናሙናዎች አፈር፣ ሰገራ፣ ደም፣ ሴሎች፣ የእንስሳት ቲሹዎች፣ እፅዋት፣ ቫይረሶች እና ሌሎችም ያካትታሉ። -የሂደት ቅደም ተከተል እና ሌሎች ሙከራዎች።

ከቀድሞው ጋር የተያያዘዲ ኤን ኤ ማግለል ኪትስ

የእንስሳት ቲሹ ዲ ኤን ኤ ማግለል ኪት--የጂኖም ዲ ኤን ኤ ከበርካታ ምንጮች እንደ የእንስሳት ቲሹዎች፣ ህዋሶች፣ ወዘተ በፍጥነት ማውጣት እና ማጽዳት።

የደም ዲ ኤን ኤ ሚዲ ኪት (1-5ml)--ከፍተኛ ጥራት ያለው ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ከፀረ-ባክቴሪያ ደም (1-5ml) በፍጥነት ያፅዱ።

Buccal Swab/FTA ካርድ ዲኤንኤ ማግለል ኪት--ከፍተኛ ጥራት ያለው ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ከቡካል ስዋብ/ኤፍቲኤ ካርድ ናሙናዎች በፍጥነት ያፅዱ።

የእፅዋት ዲ ኤን ኤ ማግለል ኪት--በፍጥነት ማጽዳት እና ከፍተኛ ጥራት ያለው ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ከዕፅዋት ናሙናዎች (ፖሊዛካካርዳይድ እና ፖሊፊኖል እፅዋት ናሙናዎችን ጨምሮ) ያግኙ።

③ ፕላዝሚድ ማውጣት

ፕላስሚድ በሴሎች ውስጥ ክብ ቅርጽ ያለው ትንሽ ሞለኪውል ዲ ኤን ኤ ነው፣ እሱም ለዲኤንኤ ዳግም ውህደት የተለመደ ተሸካሚ ነው።የፕላዝሚድ የማውጣት ዘዴ አር ኤን ኤን ማስወገድ ፣ ፕላዝማይድን ከባክቴሪያ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ መለየት እና ፕሮቲን እና ሌሎች ቆሻሻዎችን በማንሳት በአንጻራዊነት ንፁህ ፕላዝማይድ ማግኘት ነው።